Optimizarea supravegherii infecţiei cu Toxoplasma gondii la unele specii de animale şi la om, ca problemă de sănătate publică în centrul şi vestul României

Acronim: TOXANOM

Nr. Cerere de finantare: 3377/2007

Nr. Contract de finantare: 51-013/18.09.2007

Director proiect: Prof. Dr. COZMA VASILE

cozmavasile@yahoo.com, Str. Mănăştur nr. 3, Cod 400372, tel: 0264-596384, int. 165, fax: 0264-593792

Coordonator proiect:

UNIVERSITATEA DE STIINTE AGRICOLE SI MEDICINA VETERINARA CLUJ-NAPOCA,

Facultatea de Medicină Veterinară, Disciplina de Parazitologie şi Boli Parazitare, Str. Calea Manăştur, nr. 3-5, cod 400372, Cluj-Napoca, Cluj

Partener 1: UNIVERSITATEA DE ŞTIINŢE AGRICOLE ŞI MEDICINĂ VETERINARĂ A BANATULUI DIN TIMIŞOARA

Partener 2: UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE “IULIU HAŢIEGANU”CLUJ NAPOACA

Partener 3: INSTITUTUL NAŢIONAL DE SĂNĂTATE PUBLICĂ BUCUREŞTI – CENTRUL REGIONAL DE SĂNĂTATE PUBLICĂ CLUJ ( fost INSTITUTUL DE SĂNĂTATE PUBLICĂ “PROF. DR. IULIU MOLDOVAN” CLUJ-NAPOCA)

Partener 4: S.C. BIOTERRA S.R.L.

Rezumatul proiectului în limba română:

Toxoplasmoza este una dintre cele mai raspandite zoonoze parazitare din lume, afectand o treime din populatia globului, determinand pierderi economice in sectorul zootehnic, prin avorturi, mortinatalitate, infertilitate. La gravida determina pierderi de sarcina, nastere prematura, deces neonatal, moarte fetala intrauterina, intarziere in dezvoltarea intrauterina si anomalii congenitale. Directiva europeana 2003/99/CE considera toxoplasmoza printre zoonozele care trebuie supravegheate. Directia de cercetare in care se incadreaza proiectul este Agricultura, siguranta si securitate alimentara (Cod 5), obiectivul specific fiind Sanatate publica veterinara, diagnosticul, supravegherea si controlul bolilor la animale (cod 5.1.14). Obiectivele se refera la:

- studiul epidemiologic parazitologic si serologic, privind prevalenta infectiei cu T. gondii la pisici si izolarea T. gondii de la pisicile pozitive coproparazitologic;

- screening serologic regional la rumegatoare mici si suine, si izolarea/identificarea T. gondii la avortoni si nou nascuti neviabili de la aceste specii;

- izolarea/identificarea T. gondii in produse alimentare de origine animala;

- screening serologic regional la populatia umana (generala, gravide si nou-nascuti cu malformatii si hipotrofici);

- prelucrarea statistica a datelor obtinute si stabilirea unor corelatii privind infectia cu T. gondii pe filiera animal – aliment – om;

- popularizarea informatiilor legate de infectia toxoplasmica in randul populatiei umane cu risc maxim;

- propunerea unor protocoale de supraveghere si profilaxie a infectiilor toxoplasmice, la om si animale, autoritatilor competente.

Proiectul propus va aduce contributii majore in ceea ce priveste cunoasterea epidemiologiei actuale reale, la nivelul regiunilor luate in studiu, atat la animale cat si la om, in ceea ce priveste infectia cu T. gondii. Se preconizeaza ca beneficiile create de acest program sa se rasfringa in final, asupra starii de sanatate a popupulatiei.

Rezumatul proiectului în limba engleză:

Toxoplasmosis is one of the most prevalent parasitic zoonotic diseases in the world, affecting third of world population, causing losses in economy, in zootechny, causing abortion, neonatal mortality, infertility. At burdensome causes losses of pregnancy, premature birth, neonatal death, intrauterine fetal death, intrauterine evolving disturbances, and congenital anomalies.

The European Directive 2003/99/CE considers toxoplasmosis among those zoonosises that must be controlled.

The specific objectives of the research refer to:

- epidemiological, parasitological and serological study of T. gondii infection in cats, isolation of T. gondii from O&P positive cats.

- Regional serological screening of small ruminants and pigs, isolation and identification of T. gondii in abortion and dead newborns of above specified species;

- isolation/identification of T. gondii in food products of animal origin,

- regional serological screening of human population (general population, pregnant women, and new-borne with malformations and hypotrophy);

- All data will be statistically processed and correlations will be established regarding animal T. gondii infection – food contamination – human infection;

- legal information regarding toxoplasmic infection will be disseminated among human population with maximum risk;

- surveying protocols and prophylaxis of toxoplasmic infection, in both humans and animals, will be proposed to competent authorities.

This project will bring major contributions to establish and up-date epidemiological parameters of T. gondii infection in both humans and animals. It is expected that the results obtained through this project will improve the health status of the population.

Autoritatea contarctanta: CENTRUL NATIONAL DE MANAGEMENT PROGRAME - CNMP, cu sediul în localitatea Bucuresti, str. Mendeleev, nr. 21-25, sector 1, codul poştal 010362, telefon 311.59.92, fax 318.87.63

Durata proiectului: 14.09.2007- 30.09.2010

Pagina web a proiectului: http://www.zooparaz.net/toxanom.html

Activitatile si responsabilitatile aferente fiecarui participant (planul de realizare):

Anul	Etape/ Activităţi	Categoria de activitate conform schemei de ajutor de stat	Organizatia executanta	Termene
2007	Etapa I: Realizarea unei baze de date bibliografice privind toxoplasmoza şi achiziţia de materiale şi echipamente			15 Decembrie 2007
	Activitate I.1: Realizarea unei baze de date bibliografice
	Studiu bibliografic privind informaţii recente pe plan naţional şi internaţional in infecţia toxoplasmica la rumegătoare mici	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Studiu bibliografic privind informaţii recente pe plan naţional şi internaţional in infecţia toxoplasmica la suine şi pisici	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P1
	Studiu bibliografic privind informaţii recente pe plan naţional şi internaţional in infecţia toxoplasmica la nou născuţi malformaţi şi hipotrofici şi la mamele acestora	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Studiu bibliografic privind informaţii recente pe plan naţional şi internaţional in infecţia toxoplasmice la om	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Activitate I.2.: Achiziţie materiale şi echipamente
	Achiziţie echipamente şi materiale	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Achiziţie echipamente şi materiale	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P1
	Achiziţie materiale (chituri ELISA)	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Achiziţie materiale (chituri ELISA)	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
2008	Etapa II: Screeninig serologic privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la rumegătoare mici şi la om			15 Iunie 2008
	Activitate II.1.: Stabilirea criteriilor de includere în loturile de studiu
	Stabilirea colaborarii cu sectiile de nou-nascuti, a criteriilor de selectare a loturilor şi prezentarea programului	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Stabilirea de eşantioane reprezentative umane din centrul şi nord-vestul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Activitate II.2.: Screening serologic
	Recoltarea şi prelucrarea serologică (ELISA, IFA) a probelor de la rumegătoare mici din centrul României,	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Recoltarea şi prelucrarea serologică (ELISA, IFA), a probelor de la rumegătoare mici din vestul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P1
	Recoltarea şi prelucrarea de probe perechi de sânge, mamă-copil	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Recoltarea şi prelucrarea serologică a probelor de la populaţia umană din zona de nord-vest a României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Activitate II.3.: Prezentarea rezultatelor parţiale obţinute comunităţii ştiinţifice	Activitati suport, B.2., B.3.	CO, P1, P2, P3
2009	Etapa III: Screeninig privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la pisici şi la om			31 Ianuarie 2009
	Activitate III.1.: Screening parazitologic şi serologic
	Recoltarea şi prelucrarea coproparazitologică şi serologică a probelor de la pisici din mediul rural şi urban din zona centrul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Recoltarea şi prelucrarea coproparazitologică şi serologică a probelor de la pisici din mediul rural şi urban din vestul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P1
	Recoltarea şi prelucrarea de probe perechi de sânge, mamă-copil	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Recoltarea şi prelucrarea serologică a probelor de la populaţia umană din zona de centru a României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Activitate III.2.: Identificarea/izolarea T. gondii la pisici
	Efectuarea de coproculturi, punerea la punct a unei metode de extracţie ADN din oochisturi şi a unei metode PCR	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Activitate III.3.: Prezentarea rezultatelor parţiale obţinute comunităţii ştiinţifice
	Analiza, interpretarea şi prezentarea rezultatelor parţiale	Activitati suport, B.2., B.3.	CO
	Analiza, interpretarea şi prezentarea rezultatelor parţiale	Activitati suport, B.2., B.3.	P1
	Interpretarea datelor pentru elucidarea diagnosticului etiologic al malformaţiilor/hipotrofiei şi al statusului imunitar al nou născutului şi prezentarea rezultatelor parţiale	Activitati suport, B.2., B.3.	P2
	Interpretarea datelor privind seroprevalenţa infecţiei toxoplasmice la populaţia umană din zona de centru a României şi prezentarea rezultatelor parţiale	Activitati suport, B.2., B.3.	P3
2009	Etapa IV: Studiu seroepidemiologic privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la suine şi la femei gravide			15 Decembrie 2009
	Activitate IV.1.: Screening serologic şi prelucrarea statistică a datelor
	Recoltarea şi prelucrarea serologică a probelor (ELISA) de la suine din centrul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Recoltarea şi prelucrarea serologică a probelor de la suine (ELISA) din vestul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P1
	Prelucrarea serologica a probelor de la gravide cu sarcini patologice si interpretarea statistica a rezultatelor de la lotul studiat	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Stabilirea susceptibilităţii la infecţia cu T. gondii la un lot de gravide aparent sănătoase, evidenţierea profilului imunologic al gravidei în primul trimestru de sarcină	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Activitate IV.2.: Prezentarea rezultatelor parţiale obţinute comunităţii ştiinţifice	Activitati suport, B.2., B.3.	CO P1 P2 P3
2010	Etapa V: Izolarea/identificarea T. gondii la avortoni si nou nascuti neviabili la rumegatoare mici si suine, diseminarea de informaţii legate de infecţia cu T. gondii , aprecierea riscului alimentar al infecţiei cu T. gondii şi interpretarea interdisciplinară a rezultatelor proiectului			14 Septembrie 2010
	Activitate V.1.: Colectare de avortoni de la animale
	Prelucrarea probelor biologice recoltate de la avortoni (secţiuni histologice, bioprobă pe şoriciei) şi punerea la punct a unei metode de extracţie ADN din materiale patologice şi a unui protocol PCR	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Colectare avortoni şi probe sânge din efective de ovine rase de import si autohtone	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P4
	Activitate V.2: Stabilirea prevalentei infectiei toxoplasmice la categorii profesionale cu risc	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Recoltarea şi prelucrarea probelor de la la populatia cu risc din sectorul medical veterinar, de crestere al animalelor si din sectorul alimentar		P3
	Activitate V.3: Izolarea/identificarea T. gondii din produse alimentare de origine animală	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO, P1
	Activitate V.4: Diseminarea de informaţii legate de infecţia cu T. gondii
	Elaborarea unor pliante de informare prenuptiala a femeilor de virsta fertila referitor la riscul infectiei cu T.gondii	Activitati suport, B.2., B.3.	P2
	Distribuirea pliantelor in cabinetele de medicina de familie si in cabinetele de consiliere prenuptiala;argumentarea necesitatii introducerii testarii anticorpilor antitoxoplasma la femei de varsta fertila	Activitati suport, B.2., B.3.	P3
	Activitate V.5.: Analiza epidemiologică a datelor obţinute la om şi animale
	Cartarea toxoplasmozei la animale în centrul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	CO
	Cartarea toxoplasmozei la animale în vestul României	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P1
	Evaluarea consecinţelor infecţiei toxoplasmice animale asupra sănătăţii gravidei şi a produsului de concepţie	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P2
	Analiza structurii morbiditatii reale prin T.gondii pe criterii epidemiologice	Activitati de cercetare dezvoltare, A.1.	P3
	Activitate V.6.: Propunerea unui protocol de supraveghere a infecţiei toxoplasmice umane şi la animale	Activitati suport, B.2., B.3.	CO P1 P2 P3 P4

Denumirea si functia organizatiei participante in cadul proiectului	Numele abreviat al organizatiei	Tipul organizatiei	2007		2008		2009		2010		Total
			B	C	B	C	B	C	B	C	B	C
CO UNIVERSITATEA DE ŞTIINŢE AGRICOLE ŞI MEDICINĂ VETERINARĂ CLUJ NAPOCA	USAMV	UNI	45000	0	233000	0	150036	0	119018	0	547054	0
P1 UNIVERSITATEA DE ŞTIINŢE AGRICOLE ŞI MEDICINĂ VETERINARĂ A BANATULUI TIMIŞOARA	USAMVB	UNI	30000	0	70000	0	91700	0	22721	0	214421	0
P2 UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE “IULIU HATIEGANU”CLUJ NAPOCA	UMF	UNI	37100	0	60950	0	75450	0	16540	0	190040	0
P3 INSTITUTUL DE SĂNĂTATE PUBLICĂ “Prof. Dr. IULIU MOLDOVAN” CLUJ NAPOCA	ISP	IP	27720	0	77000	0	96370	0	10751	0	211841	0
P 4 S.C. BIOTERRA S.R.L.	BIOTERA	SRL	0	0	0	0	0	0	16784	16000	16784	16000
Total proiect			139820	0	440950	0	413556	0	185814	16000	1180140	16000

Bugetul proiectului:

Rezultate obtinute in etapa 1: Realizarea unei baze de date bibliografice privind toxoplasmoza şi achiziţia de materiale şi echipamente

Obiectivele propuse în etapa I a proiectului "Optimizarea supravegherii infecţiei cu Toxoplasma gondii la unele specii de animale şi la om, ca problemă de sănătate publică în centrul şi vestul României" s-au referit la realizarea unui studiu bibliografic privind toxoplasmoza la om şi animale, prin consultarea bibliografiei naţionale şi internaţionale, şi achiziţia de materiale şi echipamente necesare desfăşurării în bune condiţii a proiectului, în etapele următoare. Au fost implicaţi coordonatorul de proiect (USAMV Cluj Napoca) şi 3 parteneri (P1 – USAMV Timişoara, P2 – UMF Cluj Napopca, P3 – ISP Cluj Napoca)

A fost consultat un bogat material bibliografic şi s-a realizat o colecţie de articole pe suport electronic şi hârtie, cu referire la toxoplasmoză la om şi animale. De asemenea s-a realizat o colecţie de adrese de internet unde pot fi găsite materiale bibliografice utile pentru elucidarea unor probleme care apar în timpul activităţii de cercetare. Au fost consultate şi cuprinse în colecţie şi lucrările unor cercetători români, prezentate la simpozionul naţional ″Toxoplasmoza în actualitate″, care s-a desfăşurat în perioada 9-10 Martie 2007 la Constanţa, şi care au apărut în Revista Română de Parazitologie vol.XVII, nr.1, 2007, şi singura monografie recentă consacrată acestui subiect din ţara noastră (Toxoplasmoza congenitală, Dana Metea-Stefănescu, Decebal-Sorin Griza, Mihaela Nodiţi, Gheorghe Budău sub redacţia Prof. Dr. Ioan Popa, Ed. Mirton Timişoara, 2003).

Au fost achiziţionate următoarele cărţi:

“Toxoplasma gondii The Model Apicomplexal: Perspectives and Methods” editată de L.M. Weiss şi K Kim , Academic Press 2007 ;

″Toxoplasmose: État des connaissances et evaluation du risqué lié a l’alimentation. Rapport du group de travail Toxoplasma gondii de l’AESSA. Redactor F. Derouin. Ed. Bialec-Nancy, 2006.

Laboratory Procedures for Veterinary Technicians, 5th edition; autor:Charles M. Hendrix; Ed.Mosby

Toxoplasma Gondii The Model Apicomplexan. Perspectives and Methods; autor:L. Weiss; Ed.Academic Press

Opportunistic Infections;autor:David S. Lindsay; Ed.Springer Verlag

Pe baza materialelor consultate, fiecare partener a elaborat o sinteză în care sunt prezentate noutăţi în domeniul ultrastructurii parazitului, a genotipurilor cunoscute şi descrise cu gradul lor de infecţiozitate şi patogenitate pentru om şi animale, a modului de transmitere, a posibilelor gazde, a relaţiilor parazit-gazdă, a epidemiologiei bolii la om şi animale, a prevalenţei în diferite zone geografice şi grupe de populaţie (imunocompetenţi, imunodepresaţi, adulţi, copii, gravide), a riscului de infecţie, statusul imunitar al fătului şi infecţia congenitală, noile tehnici şi protocoale de diagnostic cu avantajele şi limitele acestora.

De asemenea, s-a făcut o analiză atentă a obiecivelor propuse pentru etapa următoare, în vederea achiziţionării de materiale necesare desfăşutării în bune condiţii a activităţilor de cercetare planificate. Astfel, s-au achiziţionat truse de diagnostic de uz uman şi veterinar, necesare realizării studiului epidemiologic privind infecţia toxoplasmică la rumegătoare mici şi om, şi pentru realizarea unui diagnostic cât mai complet al infecţiei toxoplasmice la copiii cu probleme (hipotrofici şi malformaţi) şi mamele acestora. Trusele achiziţionate sunt următoarele: latex aglutinare necesare screeningului populaţional şi nou-născuţilor (aceste truse sunt rapide şi permit selectarea serurilor care trebuie analizate în detaliu), truse ELISA pentru evidenţierea anticorpilor de tip IgG, IgM şi IgA, la om şi animale (rumegătoare mici) şi truse Western Blot, pentru stabilirea cu precizie a infecţiilor congenitale la om.

Fiecare partener a achiziţionat echipamente: echipamente cazare şoricei, un calculator cu periferice, un laptop şi periferice, trei frigidere, pentru păstrarea în bune condiţii a serurilor şi chiturilor şi un congelator. De asemenea au fost achiziţionate materiale de protecţie şi dezinfecţie, consumabile de laborator şi birotică necesare desfăşurării în bune condiţii a activităţii de diagnostic şi cercetare de laborator şi a celei teoretice explicative din cadrul proiectului.

Rezultate obtinute in etapa 2: Screeninig serologic privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la rumegătoare mici şi la om

În cadrul acestei etape s-a realizat screening serologic privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la rumegătoare mici (ovine, caprine) şi la om, populaţie generală şi perechi mamă-nou născut, în centrul şi nord-vestul României.

Screeningul serologic la rumegătoare mici a fost realizat de către CO (coordonator de proiect – Universitatea de Ştiinţe Agricole şi Medicină Veterinară Cluj Napoca) în zona de centru a ţării şi P1 (partener 1 - Universitatea de Ştiinţe Agricole şi Medicină Veterinară Timişoara) în zona de vest a ţării. La populaţia umană, cercetările au fost realizate de către P3 (partener 3 – Universitatea de Medicină şi Farmacia „Iuliu Haţeganu” Cluj Napoca) la perechi mamă-nou născut şi P4 (partener 4 – Institutul de Sănătate Publică Cluj Napoca) la populaţia generală din zona de nord-vest a ţării.

În România datele privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la animale sunt limitate, iar o prevalenţă ridicată are implicaţii în sănătatea publică.

În cadrul screeningului serologic realizat la rumegătoare mici în zona de centru a ţării (coordonatorul de proiect) au fost recoltate probe de sânge de la 1706 ovine, din care 1585 ovine adulte şi 121 tineret (1 lună – 1 an) şi 401 caprine, din care 371 caprine adulte şi 30 iezi în vârstă de până la 2 luni. Serurile au fost prelucrate în direcţia depistării anticorpilor (IgG) anti-T. gondii prin metoda imunoenzimatică ELISA, utilizând un chit comercial. Serurile cu reacţie dubioasă au fost retestate prin tehnica imunofluorescenţei indirecte.

Prevalenţa anticorpilor (IgG) anti-T. gondii (ELISA), la oile adulte a fost de 64.51%(1021/1585), iar la caprele adulte 63.88 %. De asemenea 3.47% (55/1585) dintre serurile de la ovine testate prin tehnica ELISA au prezentat un rezultat echivoc, iar la retestarea acestora prin reacţia de imunofluorescenţă indirectă s-au înregistrat rezultate diferite în funcţie de diluţia serurilor (reacţii pozitive: diluţie 1:32 – 51/52; diluţie 1:64 – 45/52; diluţie 1:128 – 40/52; diluţie 1:256 - 28/52), astfel că prevalenţa finală la ovinele adulte a fost de 67.63%(1072/1585). Dintre cele 19 seruri provenite de la caprine cu reacţie dubioasă la ELISA, 11 au prezentat reacţie pozitivă la imunofluorescenţa indirectă (IFI), 2 au fost dubioase şi 6 negative, la o diluţie a serurilor de 1:64.

La tineretul ovin prevalenţa anticorpilor (IgG) anti-T. gondii (ELISA) a fost de 26.44%(32/121), iar la iezi de 3.33%.

Partenerul 1 în vederea realizării screeningului serologic la rumegătoare mici în zona de vest a ţării a recoltat 1630 probe de ser de la ovine din judeţele Caraş-Severin, Timiş şi Arad. Acestea au fost prelucrate prin metoda imunoenzimatică ELISA. În judeţul Caraş-Severin, pozitivitatea a fost de 61,37%, cu variaţii între 0 şi 77,77%. În judeţul Arad, pozitivitatea a fost de 42,4%, cu variaţii între 26 şi 70%. În judeţul Timiş, pozitivitatea la adulte a fost de 36,33%, cu variaţii între 8 şi 70%, iar la miei de 6,5%, cu variaţii între 0 şi 12%.

Partenerul 2 în această etapă a început studiul serologic al populaţiei de nou-născuţi pentru stabilirea riscului de apariţie a toxoplasmozei congenitale. S-au stabilit toate elementele colaborării cu secţiile de nou-născuti, modul de selectare a loturilor şi de recoltare a probelor. Ritmicitatea aducerii probelor la laboratorul de Microbiologie pentru a fi lucrate (săptămânal). S-au recoltat probe de sânge perechi de la lăuză şi nou-născut pentru testarea imunităţii antitoxoplasmice la lotul de nou-născuţi cu simptomatologie sugestivă pentru toxoplasmoză congenitală (malformaţi, prematuri, hipotrofici, probleme oculare) şi de la nou-născuţii declaraţi sănătoşi pentru constituirea lotului martor. Serurile au fost testate prin metoda imunoenzimatică, pentru prezenţa anticorpilor de tip imunoglobuline G, M şi A, iar o parte din ele, cele pozitive pentru Ig G, au fost testate pentru aprecierea avidităţii (afinităţii) Ig G, pentru o mai bună interpretare a rezultatelor.

În populaţia de nou-născuţi analizată a fost înregistrată o seropozitivitate mare pentru T.gondii (59%). Cazurile de toxoplasmoză congenitală în rândul nou-născuţilor cu patologie sugestivă pentru această entitate clinică au fost reprezentative procentual (6.78%). Determinarea Ig A antitoxoplasmice la nou-născuţii cu suspiciune clinică de toxoplasmoză congenitală este absolut necesară datorită prezenţei unui procent semnifictiv de cazuri cu serologie negativă tranzitorie pe Ig M.

Partenerul 3 a efectuat studiu epidemiologic privind infecţia cu T. gondii la populaţia umană din zona de nord-vest a României. În acest sens s-a stabilit mărimea eşantionului pentru 11 judeţe utilizând programul Epiinfo 3.4. Datele epidemiologice şi probele biologice s-au obţinut din 5 judeţe, din regiunea de NV a României: Bihor, Satu-Mare, Maramureş, Sălaj şi Cluj. S-a realizat un studiu descriptiv, care a urmărit seroprevalenţa anticorpilor IgG, în funcţie de varietatea factorilor epidemiologici ca vârstă, distribuţia geografică, statusul socio-economic, şi un studiu analitic, de tip caz control, care a urmărit evaluarea riscului infecţiilor cu Toxoplasma gondii (cercetarea pozitivităţii IgG şi Ig M pentru toxoplasmoză şi consecinţele acestor infecţii) şi existenţa sau absenţa asocierii epidemiologice între diverşi factori de risc şi boală. Probele recoltate au fost prelucrate prin metoda ELISA (truse de diagnostic de tip DiaSorin) şi metoda de latexaglutinare (truse Bio Rad).

Nivelul de seropozitivitate IgG fată de Toxoplasma gondii a fost de 59,82% în zona de N -NV a ţării , cu unele variaţii intrazonale care au fost determinate de structura lotului investigat. Anticorpii anamnestici IgG sunt in proporţie mai ridicată la populaţia de sex masculin, în urban şi la adulţi. Riscul infeţiei cu T. gondii este prezent la toate vârstele. Chiar dacă per ansamblu bărbaţi par a fi mai susceptibili la infecţie, trebuie acordată o mare atenţie femeilor, în special a celor de vârstă fertilă, în raport cu infecţia toxoplasmică asimptomatică , cu consecinţe grave în transmiterea congenitală. Seropozitivitatea la femei de 57,58% demonstrează nivelul infecţiei asimptomatice, nivel ridicat, având în vedere că screeningul serologic pentru infecţia cu Toxoplasma gondii nu este inclus in testele de rutină în România. Tehnica Latex aglutinare care evidenţiază anticorpi totali şi este o metodă calitativă este pentru screeningul populaţional. Anticorpii specifici IgM, dispar la interval scurt după infecţie şi sunt utili de titrat în diagnosticul de boală acută şi nu în cazul investigării stării de imunitate a unui grup populaţional asimptomatic.

Este foarte important să se cunoască gradul de receptivitate al populaţiei faţă de infecţia cu T.gondii pentru a aprecia necesitatea măsurilor de prevenire şi protecţia a populaţiei, în special a populaţiei feminine de vârstă fertilă.

De asemneea în urma cercetărilor inteprinse la rumegătoare mici s-a observat existenţa unei prevalenţe foarte mari. Datorită prevalenţei ridicate depistate există un risc real de contaminare a populaţiei umane, din zonele respective, prin consum de carne insuficient preparată termic şi lapte nefiert. Se impune implementarea unor măsuri adecvate de profilaxie şi management, care să reducă rata de infecţie şi transmitere a infecţiei toxoplasmice la aceste animale.

Etapa a doua a proiectului, aduce contribuţii majore (la nivel naţional, regional şi local - indicator de rezultate 7) asupra cunoaşterii epidemiologiei actuale reale, la nivelul regiunilor luate în studiu, la animale (rumegătoare mici: ovine şi caprine) şi la om (populaţia generală şi mame-nou născuţi) în ceea ce priveşte infecţia cu T. gondii. Obiectivele fazei a doua au fost îndeplinite în totalitate, respectând astfel, termenii contractuali.

O parte din rezultatele obţinute în cadrul acesti faze (Faza II la contractul de finanţare nr. 51-013/2007) au fost prezentate şi publicate (indicator de rezultate 4):

Ø la simpozionul “Progrese şi perspective în medicina veterinară” ce a avut loc în perioada 5-6 Iunie 2008 la Facultatea de medicină Veterinară “Ion Ionescu de la Brad” Iaşi: Titilincu Adriana, Mircean Viorica, Cozma V., 2008. Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in goats from centre and nord-west of Romania. În Programul şi rezumatul lucrărilor, pag. 53. – CO. Această lucrare va fi tipărită în extenso în volumul simpozionului.

Ø la simpozionul „Actualities in animals breeding and pathology”, 17-18 Aprilie 2008, Facultatea de Medicină Veterinară Timişoara: Hotea Ionela, Dărăbuş Gh., 2008. „Identificarea infecţiei cu Toxoplasma gondii la ovine, în judeţul Caraş-Severin”, Vol. de Lucrari Ştiinţifice – P1.

Ø la al XVIII-lea Congres European de Microbiologie Clinica şi Boli Infecţioase (ECCMID), 19-22 Aprilie, Barcelona, Spania şi publicate în suplement 7, vol 14 din Clinical Microbiology and Infection: „Clinical manifestation of congenital toxoplasmosis and their importance in the prophylaxis of congenital malformations” – L.M.Junie, on behalf of ESGP, poster P1-881 – P2;

Ø “Al X-lea Congres Naţional de Boli Infecţioase cu participare internaţională” 4-7 iulie 2008: “Stabilirea etiologiei parazitare la cazurile clinic suspecte de infecţie, prin tehnici de laborator” Rev. Clujul-Medical, vol. LXXXI, 2008, Supliment, pag.242-243 – P3

Ø “Al X-lea Congres Naţional de Boli Infecţioase cu participare internaţională” 4-7 iulie 2008: “Toxoplasmoza la gravide, gravide la risc şi femei de vârstă fertilă”, Rev.Clujul-Medical, vol. LXXXI, 2008, Supliment, 245-246 – P3

Rezultatele cercetărilor intreprinse în cadrul acestui proiect de asemenea, vor fi prezentate (indicator de rezultate 5) la X^th European Multicolloquium of Parasitology, Paris, 24-28.08.2008, la Congresul Naţional de Parazitologie, ce va avea loc în noiembrie 2008 la Cluj-Napoca organizat de Asociaţia Parazitologilor din România şi la “Conferinta internaţională de patologie celulară şi tisulară comparata”, 3-5 iulie 2008, Cluj-Napoca.

S-au efectuat 5 mobilităţi externe, după cum urmează (indicator de rezultate 11):

Ø CO: Prof. Dr. Cozma Vasile, Conf. Dr. Gherman Calin si CS Postdoc. Dr. Blaga Radu – Stara Zagora (Bulgaria) la Conferinta „Parasitology days in Bulgaria” care s-a desfasurat in perioada 11-14.06.2008;

Ø P1: drd. Imre Kalman – Lisabona (Portugalia) la instruirea cu titlul „Training In Molecular Biology Methods Applied To The Epidemiology Study Of Intestinal Protozoa” care s-a desfasurat in perioada 20.04.2008 – 04.05.2008;

Ø P2: Prof. Dr. Junie Monica – Barcelona (Spania) la conferinta cu titlul “The 18 European Congress Of Clinical Microbiology And Infections Diseases”, care s-a desfasurat in perioada 17.04.2008-24.04.2008.

Valoarea totală a investiţiilor în cadrul proiectului (indicator de rezultate 12) a fost de 117686.16 lei. S-a achiziţionat mobilier laborator, un cititor plăci ELISA, spălător plăci ELISA, un computer, un sistem digital achiziţie şi prelucrare imagine şi pipetă automată mecanică cu volum reglabil cu 8 canale.

Rezultate obtinute in etapa 3: Screeninig privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la pisici şi la om

Toxoplasmoza este una dintre parazitozele cu prevalenţa cea mai ridicată care afectează toate vertebratele cu sânge cald. Pisicile sunt singurele gazde care pot completa ciclul biologic al agentului etiologic (T. gondii), şi ele contamineaza mediului exterior, prin eliminarea odată cu fecalele de oochisturi rezistente. La om se apreciază că o treime din populaţia globului este serologic pozitivă, iar cunoaşterea magnitudinii infecţiei cu T.gondii în populaţie este deosebit de utilă. De mare importanţă pentru populaţia umană este toxoplasmoza congenitală, care apare la făt numai în cazul unei infecţii primare a gravidei şi poate fi prevenită fie prin efectuarea unor examinări serologice în dinamică la toate gravidele pentru a surprinde momentul unei eventuale infecţii şi luarea măsurilor necesare pentru prevenirea infectării fătului, fie prin testarea screening a tuturor nou-născuţilor pentru prevenirea prin instituirea precoce a tratamentului a formelor latente, majoritare în cadrul copiilor afectaţi.

Semnalarea unei incidenţe crescute a toxoplasmozei la om şi animale, pe plan internaţional şi numărul redus al datelor bibliografice din ţara noastră cu privire la infecţia toxoplasmică la animale şi oameni, motivează scopul cercetărilor noastre. În această etapă (Etapa III/31.01.2009) a contractului 51-013/2007 ne-am propus: estimarea prevalenţei pisicilor coproeliminatoare de oochisturi (flotatie, PCR) de T. gondii şi prevalenţa anticorpilor antitoxoplasmici la pisici în centrul şi vestul ţării, dezvoltarea şi implementarea unor metologii de lucru; estimarea prevalenţei anticorpilor specifici anti T.gondii în populaţia sănătoasă din zona centrală a României, pentru a cunoaste starea de imunitate, susceptibilitatea la infecţie, cunoaşterea acestora aducând precizări privind riscul de contaminare cu parazitul în zona luată în studiu; evidenţierea prevalenţei toxoplasmozei congenitale la nou născuţi şi aplicarea unei conduite de depistare a acestor copii.

Prevalenţa pisicilor coproeliminatoare de oochisturi (examen coproparazitologic) de T. gondii/H. hammondi în centrul ţării a fost de 1.2% (5/417) iar în vestul ţării de 0% (0/185). Prin PCR a fost identificată în fecale la pisică T. gondii la 2.85% dintre acestea (2/70) iar la 10.5% (6/57) H. hammondi. A fost izolată prima suşă de H. hammondi (Hh-Cj1/257) de la noi din ţară, de la o pisică din judeţul Cluj, din mediul rural. De asemenea au fost diagnosticate şi alte tipuri de infestaţii parazitare la pisici: în centrul ţării infecţii/infestaţii cu Cryptosporidium spp., Giardia spp., Sarcocystis spp., Isospora spp., Taenia spp., Dipylidium caninum, Toxocara cati, Ancylostoma/Uncinaria, Strongyloides stercoralis, Capillaria aerophila şi Aelurostrongylus abstrusus iar în vestul ţării cu Trichocephalus spp., Toxocara spp., Ancylostoma/Uncinaria spp. şi Taenia spp. 58.5% (155/265) dintre pisicile din centrul ţării au prezentat anticorpi anti-T. gondii de tipul IgG iar 12% (11/92) de tipul IgM, iar la pisicile din vestul ţării au fost identiifcaţi anticorpi anti-T. gondii la 65.4% pisici. Seroprevalenţa la pisici a crescut odată cu înaintarea în vârstă pisicile adulte fiind seropozitive într-un procent mai mare. De asemenea seroprevalenţa anticorpilor anti-T. gondii a fost semnificativ mai mare la pisicile din mediul rural şi la cele cu acces în mediul exterior. În ccea ce priveşte sexul pisicilor CO nu a observat nici o asociere al acestui factor cu prevalenţa, în timp ce P1 observă o prevalenţă mai mare la masculi dar fără a se specifica semnificaţia statistică. Alţi factori de risc observaţi au fost reprezentaţi de hrană, şi anume carnea şi resturile menajere.

CO a dezvoltat o metodă „in house” ELISA (indicator 6) de depistare a pisicilor infectate cu T. gondii, metodă care a prezentat o sensibilitatea de 94.828 (IC=89.128-100) şi specificitate de 73.529 (IC=58.700-88.359), o metodă originală de extracţie a ADN-ului genomic de T. gondii şi H. hammondi din fecale de pisici şi o metodă PCR (T. gondii şi H. hammondi) (indicator 6).

În populaţia umană din centrul ţării, P3 a observat un nivel de seropozitivitate IgG faţă de Toxoplasma gondii de 55.8%. Anticorpii anamnestici IgG au fost în proporţie mai mare la populaţia din rural şi la adulţi şi apropiată la sexul masculin şi feminin. Seropozitivitatea la femei de 56.1% demonstrează un nivel de infecţie asimptomatice ridicat, având în vedere că screeningul serologic pentru infecţia cu Toxoplasma gondii nu este inclus în testele de rutină în România.

Asocierea între naşterea unui copil cu toxoplasmoză şi mediul rural a fost la limita semnificaţiei statistice. P2 constată că la 8,6% dintre nou-născuţi confirmarea pe baze serologice a diagnosticului clinic de toxoplasmoză congenitală a putut fi realizată datorită testării IgA antitoxoplasmice, deoarece IgM au fost negative, subliniind astfel beneficiul testării acestui tip de imunoglobuline în screening-ul serologic la nou-născuţi. Diagnosticul de toxoplasmoză congenitală a putut fi susţinut pe baza analizelor serologice la 14,3 % din nou-născuţii lotului la risc R (selectaţi pe criterii clinice din 4000 nou-născuţi/an). In aceste condiţii numărul de cazuri de toxoplasmoză congenitală pe an la mia de nou-născuţi ar fi de 3 cazuri. Frecvenţa toxoplasmozei congenitale la grupul format din nou-născuţii cu anomalii severe craniene (microcefalie, hidrocefalie) sau viscerale (hepatosplenomegalie, icter) a fost semnificativ statistic mai mare faţă cei care nu prezintă acest tip de patologie (p = 0,0032 << 0.05). A existat o diferenţă semnificativă statistic între frecvenţa toxoplasmozei congenitale, certificată prin prezenţa Ig A, la nou-născuţii cu afectare oculară (p = 0,0001< 0.05) faţă de nou-născuţii care nu au prezintat acest tip de simptomatologie.

În urma analizei chestionarelor completate de proprietarii de pisici a rezultat că 62.9% dintre aceştia aveau informaţii despre toxoplasmoză, dar în mediul rural numai 28%. 22.1% (31/140) proprietari au avut ca sursă de informare mass media, 8.6% (12/140) medicul uman şi 36.4% (51/140) medicul veterinar.

O parte din rezultatele obţinute în cadrul acestei etape sau în etapele anterioare au fost publicate sub formă de articole (4) (indicator 4) sau au fost prezentate la manifestări ştiinţifice naţionale (2) şi internaţionale (2) (mobilităţi din care internaţionale 0.833/om/lună) (indicator 11). Cercetările efectuate sunt studii de necesitate publică întrucât toxoplasmoza este o zoonoză gravă iar la noi în ţară la ora actuală nu există un program de monitorizare la om (femei de vârstă fertilă) şi protocoale de diagnostic standardizate. Astfel au fost realizate 3 studii de interes naţional (prevalenţă toxoplasmoză la pisici, om şi nou născuţi), 4 studii de interes regional (prevalenţa toxoplasmozei la pisici în centrul şi vestul ţării, prevalenţa toxoplasmozei la oameni în centrul ţării şi prevalenţa toxoplasmozei la nou născuţi) şi studii de interes local (indicator 7). În realizarea activităţilor au fost implicaţi doctoranzi şi postdoctoranzi (doctoranzi Iovu Anamaria, Hotea Ionela; postdoctoranzi Titilincu Adriana) echivalent normă întreagă 0.243 respectiv 0.95 (indicator 10). Valoarea investiţiilor în această etapă a fost de 6599.68 lei (indicator 12), reprezentând 1.98 din valoarea totala a acestei etape (III). De asemenea este susţinută o reţea de cerectare intitulată “Centrul de cercetare, supraveghere, diagnostic şi controlul zoonozelor” (indicator 14). Rata de succes în depunerile de proiecte în anul 2008 a fost de 66.66% (idicator 13).

Rezultate obtinute in etapa 4: Studiu seroepidemiologic privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la suine şi la femei gravide

În cadrul etapei IV a proiectului 51-013/2007 s-a realizat screening serologic privind prevalenţa infecţiei cu T. gondii la suine în centrul (CO) şi nord-vestul României (P1). De asemenea s-a urmărit prelucrarea serologică a probelor provenite de la gravide cu sarcini patologice şi interpretarea statistică a rezultatelor (P2), precum şi stabilirea susceptibilităţii la infecţia cu T. gondii la un lot de gravide aparent sănătoase şi evidenţierea profilului imunologic al gravidei în primul trimestru de sarcină (P3).

În cadrul screeningului serologic realizat la suine în zona de centru (coordonatorul de proiect) si vest (partenerul 1) a ţării au fost recoltate probe de sânge de la 6155 suine, din care 2731 suine din sitemul intensiv de creştere (1171 suine reproducţie, 1560 grăsuni si tineret), 3372 suine provenite din sistemul extensiv si 52 porici mistreti. Serurile au fost prelucrate în direcţia depistării anticorpilor (IgG) anti-T. gondii prin metoda imunoenzimatică ELISA, utilizând două chituri comerciale (ID VET sau Safe Path), precum şi prin metoda de imunofluorescenţă indirectă (IFI).

Seroprevalenţa anticorpilor (IgG) anti-T. gondii, la suinele din sistemul intensiv a fost de 7.2%-17.9% in zona de centru si nord-vest a tarii si de 0-7% in zona de vest a tarii. La garsuni prevalenta medie a fost de 0.6%, iar la porcii de reproductie de 16.8%. În ceea ce priveşte suinele din sistemul extensiv seroprevalenţa a fost de 32.7-42.9% in zona de centru si nord-vest a tarii şi de 21.9% in zona de vest a tarii. La reacţia de imunofluorescenţă indirectă titrul anticorpilor s-a situat intre 1:32 si 1:2415. La mistreti prevalenta in vestul tarii a fost de 94.2%.

Partenerul 2, în această etapă a realizat analize serologice (determinarea profilului imunologic antitoxoplasmic prin determinarea Ig G, Ig M şi Ig A specifice antitoxoplasmice) la gravide cu sarcini patologice din zona de centru a României si s-au determinat indicatori epidemiologici legaţi de riscul anual de contaminare cu T.gondii, riscul de avort spontan şi prezenţa infecţiei cu T.gondii. Seropozitivitatea antitoxoplasmică la gravide a fost de 39 % iar diagnostic de toxoplasmoză acută în sarcină a fost stabilit la 3% din gravidele testate, majoritatea cazurilor fiind înregistrate pe parcursul trimestrului I de sarcina. Riscul de infecţie anual al populaţiei feminine cu vârsta cuprinsă între 20-33 de ani este de 0,67 %, iar tendinţa sa de evoluţie este crescătoare cu vârsta.

Partenerul 3 a stabilit prevalenţa anticorpilor specifici anti T.gondii la gravidele sănătoase. Pentru aceasta au fost investigate serologic, în perioada 2007-2009, 487 de gravide fără simptomatologie de boală, cu vârste cuprinse între 19 şi 34 de ani, pentru anticorpi antitoxoplasma IgA, IgM, IgG, folosind tehnica ELISA şi testul de Aviditate IgG. S-a constatat o seroprevalenţă de 46,41%. Într-o proporţie de 34,90% persoanele investigate prezentau imunitate faţă de parazit, anticorpii titraţi fiind din clasa IgG. Anticorpii IgG au fost asociaţi cu IgM-uri în 4,70% din cazuri, cu IgA-uri în 0,62%, cu IgM şi IgA în 4,11%. În aceste situaţii, cu posibile infecţii recente, au fost 46 de persoane. Probele acestora au fost testate şi pentru aviditate IgG în vederea stabilirii momentului infecţiei. La 7 dintre acestea (1,44%) aviditatea a fost slabă, fiind un indiciu al primo infecţiei. Anticorpii IgM au fost prezenţi singuri în 1,03% din serurile testate, iar în asociere cu IgA-uri în proporţie de 0,62 %, în timp ce IgA-uri singure în procent de 0,41% din cazurile analizate. Din totalul serurilor testate la un procent de 3,49% a existat suspiciunea primo infecţiei.

O parte din rezultatele obţinute în cadrul acestei etape sau în etapele anterioare au fost publicate sub formă de articole in extenso (5) (indicator 4) sau au fost prezentate la manifestări ştiinţifice naţionale (4) si internationale (2). Cercetările efectuate sunt studii de necesitate publică întrucât toxoplasmoza este o zoonoză gravă iar la noi în ţară la ora actuală nu există un program de monitorizare la om (femei de vârstă fertilă) şi protocoale de diagnostic standardizate. Astfel au fost realizate 2 studii de interes naţional (prevalenţă toxoplasmoză la suine si femei cu sarcina normala si patologica) (indicator 7). În realizarea activităţilor au fost implicaţi doctoranzi şi postdoctoranzi (doctoranzi Iovu Anamaria, Hotea Ionela; postdoctoranzi Titilincu Adriana si Blaga Radu) echivalent normă întreagă 0.11 respectiv 0.47 (indicator 10). Nu s-au efectuat investitii in echipamente.

Descrierea/prezentarea diferitelor evenimente derulate in cadrul proiectului:

A XVI-a Conferinta Nationala de Parazitologie, 8-10 noiembrie 2007 - Constanta

- Mederle N., Darabus G., Hotea I., Mederle O. - Surse si modalitati de infestare in toxoplasmoza

- Zoe Coroiu, Judith Bele, Cornelia Munteanu, Rodica Radu - Parazitozoonoze în populaţia judeţului Cluj evidenţiate prin investigaţii de laborator

- Rodica Radu, Zoe Coroiu, Romana Rebreanu, Cornelia Munteanu, R. Radu - Riscul materno-fetal în infecţia TORCH

The XVIII European Congres of Clinical Microbiology and Infectious Disease, Barcelona, Spain, 19-22 April, 2008

- Junie L.M. - Clinical Manifestation of congenital toxoplasmosis and their importance in the prophylaxis of congenital malformations

Actualities in animals breeding and pathology, 22-23 mai 2008, Timisoara.

- Hotea Ionela, Darabus Gh. - The identification of Toxoplasma gondii infection in sheeps from Caras-Severin County

“Progrese şi perspective în medicina veterinară”, 5-6 Iunie 2008 la Facultatea de medicină Veterinară “Ion Ionescu de la Brad” Iaşi

- Titilincu A., Mircean V., Cozma V. - Seroprevalenţa infecţiei cu Toxoplasma gondii la capre în centrul şi nord-vestul Românie (comunicare orala)

International conference of cellular and tissue comparative pathology, 3-5 iulie 2008, Cluj-Napoca

- Hotea Ionela, Darabus Gh., Ilie M.S., Imre K. - Changes produced by Toxoplasma gondii in host-cell biology – Bibliographic study-

Al X-lea Congres National de Boli Infectioase cu participare internationala 4-7 iulie 2008, Cluj-Napoca

- Rodica Radu, Zoe Coroiu, Romana Rebreanu, Cornelia Munteanu, R. Radu - Toxoplasmoza la gravide, gravide la risc şi femei de vârstă fertilă

- Zoe Coroiu, Anca Florea, Romana Rebreanu, Mihaela Lazar - Stabilirea etiologiei parazitare la cazurile clinic suspecte de infecţie, prin tehnici de laborator.

Xth European Multicolloquium of Parasitology from satellites to microsatellites, Paris, Franţa, 24-28.08.2008.

- Titilincu A., Mircean V., Blaga R., Iovu A., Onac D., Chitimia L., Cozma V - Seroprevalence of Toxoplasma gondii infections in sheep and goats from Transylvania (comunicare orala)

- Titilincu A., Mircean V., Iovu A., Blaga R., Onac D., Cozma V. - The prevalence of Toxoplasma gondii infection in cats in Romania.(poster)

- Mircean V., Titilincu A., Cozma V. - Prevalence of parasite in cats from Transylvania, (Romania). (poster)

- Carmen Costache, Ioana Colosi, Monica Junie - The importance of antitoxoplasmic IgA detection in newborns

- Ioana Colosi, Carmen Costache, Monica Junie, Georgeta Gocan - Serologic profile for toxoplasmic infection in pregnant women in Cluj county.

- Rodica Radu, Zoe Coroiu, Cornelia Munteanu, Romana Rebreanu, R. Radu - TORCH infections in pregnancy

Toxoplasma Centennial Congress: From Discovery to Public Health Management, Buzios, Rio de Janero, Brazilia, 20-25.09.2008

- Mircean V., Titilincu A., Cozma V. - Prevalence of Toxoplasma gondii infections in domestic cats from Romania. (poster)

- Titilincu A., Mircean V., Iovu A., Blaga R., Onac D., Cozma V. - Seroprevalence of Toxoplasma gondii infections in small ruminants from Romania. (poster)

7^th International Symposium Prospects for the 3^rd Millennium Agriculture, Cluj Napoca, Romania, 2-4.10.2008

- Iovu A., Titilincu A., Mircean V., Blaga R., Bejan A., Cozma V. - Serosurvey of Toxoplasma gondii in sheep for human consumption in two slaughter-house. (comunicare orala)

A XVIII-a, Conferinta Naţională de Parazitologie, Cluj Napoca, Romania, 6-8.11.2008

- Cozma V., Titilincu A., Mircean V., Blaga R., Iovu A. - Infecţia cu Toxoplasma gondii la animale în România. (comunicare orala)

- Mircean V., Titilincu A., Cozma V. - Prevalenţa parazitozelor la pisici din Transilvania (poster)

- Titilincu A., Blaga R., Halos L., Mircean V., Boiereanu P., Cozma V. - Evaluarea unor chituri comerciale (ELISA ŞI MAT) utilizate în diagnosticul serologic al infecţiei toxoplasmice la ovine infecatate natural (comunicare orala)

- Iovu A., Traversa D., Milillo M., Titilincu A., Cozma V. – Aplicarea unei metode PCR calitative pentru determinarea Toxoplasma gondii in tesuturile avortonilor de oaie. (poster)

- Hotea Ionela, Darabus Gh., Oprescu I., Morariu S., Mederle Narcisa, Ilie M.S., Imre K. - Identificarea infectiei cu Toxoplasma gondii la ovine adulte, in judetul Timis

- Zoe Coroiu, Anca Florea, Judith Bele, Mihaela Lazar - Importanţa serodiagnosticului în suspiciunea de boală parazitară

Actualities in animals breeding and pathology, Timişoara, 21-22.05.2009

- Hotea I., Dărăbuş G., Ilie M., Imre K., Oprescu I., Morariu S., Mederle N. - The Identification of Toxoplasma gondii Infection in Sheep from Arad County.

A XVIII-a Conferinţă Naţională de Parazitologie, 26-28 septembrie, Constanţa, 2009

- Titilincu A., Mircean V., Iovu A., Cozma V. - Prevalenţa infecţiei cu Toxoplasma gondii la pisici domestice din Transilvania. (prezentare orală)

- Şuteu O., Titilincu A., Modry D., Mihalca A., Mircean V., Cozma V. - Cercetări epidemiologice privind infecţia cu Neospora caninum şi Toxoplasma gondii la bovine în centrul României. (prezentare orală)

- Mircean V.,Titilincu A., Iovu A., Cozma V. - Prevalenţa endoparazitozelor la pisici (Felis catus) din Transilvania şi identificarea factorilor de risc. (prezentare orală)

- Hotea I., Dărăbuş G., Ilie M.S., Imre K., Oprescu I., Morariu S., Mederle N., Ciocan R., Balint A., Indre D., Imre M., Sorescu D. - Prevalenţa infecţiei cu Toxoplasma gondii la ovine şi pisici în judeţul Arad.

COST Action FA 0805: 1st Working groups workshop&Management Committee meeting 1-9.10.2009

- Titilincu A., Mircean V., Iovu A., Gavrea R., Cozma V. - Seroprevalence of Toxoplasma gondii and Neopsora caninum infection in goats from center and north-west Romania. (prezentare orala)

8^th International Symposium Prospects for the 3^rd Millennium Agriculture, Cluj Napoca, Romania, 7-10.10.2008

- Iovu A., Titilincu A., Mircean V., Blaga R., Voinescu V., Cozma V. - Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in indoor pigs, from center and north-western of Romania. (prezentare orala)

- Titilincu A., Mircean V., Iovu A., Cozma V. - Development of an Indirect ELISA test using tachyzoite crude antigen for sero-diagnosis of sheep Toxoplasma gondii infection. (prezentare orala)

SERBPARZOON Project Conference - Parasitic zoonoses in present day Europe. Focus on south-east, 18-20.11.2009 Belgrad

- Cozma V., Titilincu A., Mircean V., Iovu A. - Toxoplasmosis in animals in Romania. (prezentare orala)

Contribuţii ale cercetării ştiinţifice la progresul medicinei veterinare, Bucureşti, 19-20.11.2009

- Hotea I., Dărăbuş G., Ilie M.S., Imre K., Ciocan R., Balint A., Indre D., Măndiţă D. - The prevalence of Toxoplasma gondii infection in cats from Hunedoara County.